CTC富集方法分类

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来源：中为咨询www.zwzyzx.com 【日期：2016-08-11 11:06:18】【打印】【关闭】

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CTC富集方法分类一览

常用CTC富集技术比较

人体循环系统中CTC的含量极低,肿瘤转移患者每毫升全血中仅有1～10个CTCs，因此要实现CTCs的检测对其进行分选富集是一个必不可少的步骤。CTC分选富集效果的优劣将会直接影响其后续的检测(计数、基因扩增、基因测序等)效果,因此高纯度、高灵敏性(不丢失CTC)、快速、高细胞活性的CTC分选富集是CTC临床应用的重点和难点。CTC的富集方法可以分为化学特性富集法（免疫亲和）和物理特性富集法。免疫亲和法主要是根据CTC表面表达的特异性的蛋白将CTC筛选出来，物理特性富集主要是根据CTC的大小和密度等特性将这些细胞筛选出来。

1.生物化学特性富集法建立在CTC生化特性的分离富集方法，主要是利用特异性抗体与细胞表面抗原进行特异性结合来富集CTC，或者去除血细胞留下肿瘤细胞。主要包括包括：阳性富集法，阴性富集法，微流体法和体内富集。

（1）阳性富集法（免疫磁珠吸附CTC）：以CellSearch为代表，在磁珠上包被细胞表面粘附分子EpCAM，来捕获CTC。

（2）阴性富集法（免疫磁珠吸附其他细胞）：也称为白细胞去除法。用特异性抗体CD45，CD14等与白细胞结合，从而去除全血中的白细胞。该方法比其它富集方法捕获效率更高，但特异性明显低于其它方法。

（3）阳性富集法（微流体法）：将抗CTC表面特定蛋白标示物(EpCAM)抗体与磁珠或微流体进行偶联，利用这些固相载体上的抗体直接从血中捕获CTC。

2.物理特性富集法：依据CTC的物理特性，如密度、大小、可变形性及表面电荷等进行富集。（1）密度梯度离心：非常廉价高效的CTC分离方法，可将CTC与白细胞和红细胞分离。目前市场上有较多的依赖密度梯度离心进行CTC富集的试剂盒，如Ficoll-Paquesolution（PharmaciaFineChemicals，Sweden），OncoQuick（GrenierBioOne,Germany）等。临床实验证明，密度梯度离心富集CTC比CellSearch系统效率更高。

（2）过滤法：依据CTC体积大于血细胞的特性，对CTC进行捕获。CTC的直径约为10um-20um，而血细胞大小为7-12um，通过过滤，留下体积比较大的CTC。然而随着近年来人们对CTC了解的不断加深，发现很多CTC实际上与白细胞一样大，有些甚至只有白细胞的一半或更小。目前有证据显示，这些小或超小CTC的数目比例在有些瘤种中可高达1/3。

（3）微流控芯片：针对CTC的体积和可变形性对CTC进行捕获，CTC的捕获率和特异性均可达到80%以上。

总的来说物理特性富集法中密度梯度离心和过滤法操作简单，成本低廉，不依赖细胞表面抗体的表达，捕获的细胞数量多，能够克服CTC在蛋白表达上的异质性，但是无法克服CTC在物理特性的异质性。生化特性法操作复杂，成本相对更高。未来，两者结合的微流控芯片将是CTC分离富集发展的趋势。

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